acm4_human

NAME

5DSG

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

acm4_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term        
M
A
N
F
T
P
V
N
G
S
10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
S
G
N
Q
S
V
R
L
V
T
20
 
                  
          TM1    
S
S
S
H
N
R
Y
E
T
V
30
                   
                   
E
M
V
F
I
A
T
V
T
G
40
                   
                   
S
L
S
L
V
T
V
V
G
N
50
                   
                   
I
L
V
M
L
S
I
K
V
N
60
                   
ICL1 TM2      
R
Q
L
Q
T
V
N
N
Y
F
70
                   
                   
L
F
S
L
A
C
A
D
L
I
80
                   
                   
I
G
A
F
S
M
N
L
Y
T
90
                   
            ECL1
V
Y
I
I
K
G
Y
W
P
L
100
                   
TM3              
G
A
V
V
C
D
L
W
L
A
110
                   
                   
L
D
Y
V
V
S
N
A
S
V
120
                   
                   
M
N
L
L
I
I
S
F
D
R
130
                   
            ICL2
Y
F
C
V
T
K
P
L
T
Y
140
                   
        TM4      
P
A
R
R
T
T
K
M
A
G
150
                   
                   
L
M
I
A
A
A
W
V
L
S
160
                   
                   
F
V
L
W
A
P
A
I
L
F
170
                   
            ECL2
W
Q
F
V
V
G
K
R
T
V
180
                   
                   
P
D
N
Q
C
F
I
Q
F
L
190
                   
  TM5            
S
N
P
A
V
T
F
G
T
A
200
                   
                   
I
A
A
F
Y
L
P
V
V
I
210
                   
                   
M
T
V
L
Y
I
H
I
S
L
220
           
 
 
 
 
                   
A
S
R
S
R
V
H
K
H
R
230
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
    ICL3        
P
E
G
P
K
E
K
K
A
K
240
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
T
L
A
F
L
K
S
P
L
M
250
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
Q
S
V
K
K
P
P
P
G
260
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
E
A
A
R
E
E
L
R
N
G
270
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
L
E
E
A
P
P
P
A
L
280
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
P
P
P
R
P
V
A
D
K
290
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
D
T
S
N
E
S
S
S
G
S
300
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
T
Q
N
T
K
E
R
P
A
310
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
T
E
L
S
T
T
E
A
T
T
320
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
A
M
P
A
P
P
L
Q
P
330
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
R
A
L
N
P
A
S
R
W
S
340
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
I
Q
I
V
T
K
Q
T
G
350
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
N
E
C
V
T
A
I
E
I
V
360
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
A
T
P
A
G
M
R
P
A
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
N
V
A
R
K
F
A
S
I
380
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
                   
A
R
N
Q
V
R
K
K
R
Q
390
                   
TM6              
M
A
A
R
E
R
K
V
T
R
400
                   
                   
T
I
F
A
I
L
L
A
F
I
410
                   
                   
L
T
W
T
P
Y
N
V
M
V
420
                   
            ECL3
L
V
N
T
F
C
Q
S
C
I
430
                   
TM7              
P
D
T
V
W
S
I
G
Y
W
440
                   
                   
L
C
Y
V
N
S
T
I
N
P
450
                   
            H8    
A
C
Y
A
L
C
N
A
T
F
460
                   
                   
K
K
T
F
R
H
L
L
L
C
470
               
 
  C-term    
Q
Y
R
N
I
G
T
A
R
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
                  
  N-term TM1
 
S
S
H
N
R
Y
E
T
V
30
                   
                   
E
M
V
F
I
A
T
V
T
G
40
                   
                   
S
L
S
L
V
T
V
V
G
N
50
                   
                   
I
L
V
M
L
S
I
K
V
N
60
                   
ICL1 TM2      
R
Q
L
Q
T
V
N
N
Y
F
70
                   
                   
L
F
S
L
A
C
A
D
L
I
80
                   
                   
I
G
A
F
S
M
N
L
Y
T
90
                   
            ECL1
V
Y
I
I
K
G
Y
W
P
L
100
                   
TM3              
G
A
V
V
C
D
L
W
L
A
110
                   
                   
L
D
Y
V
V
S
N
A
S
V
120
                   
                   
M
N
L
L
I
I
S
F
D
R
130
                   
            ICL2
Y
F
C
V
T
K
P
L
T
Y
140
                   
        TM4      
P
A
R
R
T
T
K
M
A
G
150
                   
                   
L
M
I
A
A
A
W
V
L
S
160
                   
                   
F
V
L
W
A
P
A
I
L
F
170
                   
            ECL2
W
Q
F
V
V
G
K
R
T
V
180
                   
                   
P
D
N
Q
C
F
I
Q
F
L
190
                   
  TM5            
S
N
P
A
V
T
F
G
T
A
200
                   
                   
I
A
A
F
Y
L
P
V
V
I
210
                   
                   
M
T
V
L
Y
I
H
I
S
L
220
           
 
             
A
S
R
S
R
V
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
mT4L            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
               
TM6          
Q
M
A
A
R
E
R
K
397
                   
                   
V
T
R
T
I
F
A
I
L
L
407
                   
                   
A
F
I
L
T
W
T
P
Y
N
417
                   
                   
V
M
V
L
V
N
T
F
C
Q
427
                   
ECL3 TM7      
S
C
I
P
D
T
V
W
S
I
437
                   
                   
G
Y
W
L
C
Y
V
N
S
T
447
                   
                   
I
N
P
A
C
Y
A
L
C
N
457
                   
H8                
A
T
F
K
K
T
F
R
H
L
467
                   
        C-term
L
L
C
Q
Y
R
N
I
G
T
477
 
 
   
A
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)        

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
 
 
TM5
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
TM5 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
mT4L
 
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
 
C-term 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)


DIAGRAMS

ICL1 R Q L Q ICL1ECL1 Y W P L ECL1ICL2 P L T Y P A R R ICL2ECL2 K R T V P D N Q C F I Q F L S ECL2ICL3 G P K E K K A K T L A F L K S P L M K Q S V K K P P P G E A A R E E L R N G K L E E A P P P A L P P P P R P V A D K D T S N E S S S G S A T Q N T K E R P A T E L S T T E A T T P A M P A P P L Q P R A L N P A S R W S K I Q I V T K Q T G N E C V T A I E I V P A T P A G M R P A A N V A R K F A S I A R N Q V R K K ICL3ECL3 Q S C I ECL3N-term M A N F T P V N G S S G N Q S V R L V T S S S H N N-termC-term Y R N I G T A R C-term R Y E T V E M V F I A T V T G S L S L V T V V G N I L V M L S I K V N T V N N Y F L F S L A C A D L I I G A F S M N L Y T V Y I I K G G A V V C D L W L A L D Y V V S N A S V M N L L I I S F D R Y F C V T K T T K M A G L M I A A A W V L S F V L W A P A I L F W Q F V V G N P A V T F G T A I A A F Y L P V V I M T V L Y I H I S L A S R S R V H K H R P E R Q M A A R E R K V T R T I F A I L L A F I L T W T P Y N V M V L V N T F C P D T V W S I G Y W L C Y V N S T I N P A C Y A L C N A T F R H Q F K K T L L L C

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 1 to 21
  • from 227 to 389
  • from 479 to 479

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: fusion

    Name: mT4L
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_1 227:389
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(8)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_2 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf9 Insect Bac-to-Bac

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DDM 1.0 %w/v
    additive CHS 0.03 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Alkylation by Iodoacetamide None
    Proteolysis by HRV 3C protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (LCP) (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 50 mg/ml
    Temperature: 20°C
    ph : 5.5-8.0

    Remarks: 1:1.5 parts w/w protein:lipid ratio

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Additional
    unknown MES 100 mM
    unknown PEG 300 25-40 % v/v
    unknown EDTA pH 8.0 50-100 mM
    Detergent
    detergent LMNG 0.01 % w/v
    Lipid
    lipid CHS 0.001 %w/v